摘要
目的建立一种快速准确诊断肠道病毒EV71型的实时荧光定量RT-PCR检测方法。方法参照NCBI公布的EV71基因序列,设计特异性引物及Taq Man探针;构建阳性重组质粒,验证其最低检测拷贝数、重复性及特异性。结果试验构建的阳性重组质粒,线性关系在9×102copies/μL~9×107copies/μL范围内检测结果良好;用该方法测得最低拷贝数为900 copies/μL,特异性和重复性(CV <5%)良好,无交叉反应;用该荧光定量RTPCR检测方法检测80份阳性样品和36份阴性样品,准确率为100%(116/116)。结论试验建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法可用于肠道病毒EV71型的快速检测。
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