稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立

作者：田宏; 吴锦艳; 龚真莉; 郑海学; 孙世琪; 尚佑军; 刘湘涛; 谢庆阁

来源：畜牧兽医学报, 2008, (04): 478-482.

• 猪水疱病病毒P1基因
• 重组逆转录病毒载体
• PK-15细胞
• 基因表达 SVDV P1 gene
• retroviral vector
• PK-15 cell
• gene expression

从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本...

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部