梨幼果FWL1膜系统酵母双杂交三框cDNA文库构建及互作蛋白的筛选

作者：赛静忆; 温玥; 郝志超; 田嘉^*

来源：新疆农业科学, 2022, 59(08): 1877-1888.

• 梨
• 果实大小
• fw2.2
• 三框c DNA文库
• 互作蛋白筛选

【目的】筛选与FWL1互作的蛋白，为研究FWL1基因调节果实大小机理提供依据。【方法】以杜梨、库尔勒香梨、鸭梨、早美香为材料，提取4个梨品种果实细胞分裂关键时期的果肉组织混样RNA。构建梨幼果FWL1膜系统酵母双杂交三框cDNA文库，并鉴定文库质量。构建诱饵载体并转化酵母菌，筛选与FWL1互作的蛋白，对初步筛选出的阳性酵母克隆进行测序并在NCBI中进行Blast比对，确定候选互作蛋白。【结果】文库库容约为3×107CFU，大于1×107CFU，平均插入片段大于1 000 bp，阳性率为≥98%。诱饵载体无自激活功能，利用共转化方法，筛选出272个与FWL1互作的蛋白质。【结论】梨幼果膜系统酵母双杂交三框c DNA文库符合酵母双杂文库的基本条件，适用于后期筛选相互作用的蛋白。筛选出的272个互作蛋白在果实发育过程中表达不同，其中collagen and calcium-binding EGF domain-containing protein 1和metallothionein-like protein可能与梨果实大小发育有关。

• 单位
  新疆农业大学