荷斯坦牛肺干细胞分离培养与生物学特性研究

作者：刘晏辰; 周世莹; 张洋; 高扬; 关伟军^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 1-13.

• 牛肺间充质干细胞组织
• 原代培养
• 诱导分化
• 检测
• 多向潜在能力研究

本研究利用荷斯坦牛肺间质干细胞（LR-MSCs)，通过体外试验观察LR-MSCs在不同条件下的成骨分化能力，以期为临床应用及组织工程提供新的种子细胞。本项目拟以3月龄荷斯坦牛（健康荷斯坦牛胎牛，0日龄，1只，1斤，雄性）为对象，通过无菌方法获得肺组织，通过组织块贴壁等方法获得LR-MSCs，并将其原代培养。通过测定3代、9代、15代细胞的生长曲线，测定其增殖时间及成体能力。利用RT-PCR技术对干细胞细胞表面标志物（CD29、CD44、CD73、CD90、CD106、CD166、CD34和CD45）进行检测。对该基因进行染色体核型分析，并对其进行遗传转化，观察该基因的多向性。结果显示，两种方法都能获得LR-MSCs，它们在体外培养时都表现为长梭形和螺旋形，并呈现典型的“S”曲线。第9世代的倍增时间比15世代的低，但比3世代的高（P<0.01)；第9代LR-MSCs的成株率较3代明显降低，而15代较高，差异有统计学意义（P <0.05）。应用RT-PCR技术检测到在LR-MSCs中特异表达的CD29，CD44，CD73，CD90。我们前期研究发现，LR-MSCs可特异性地表达CD29，CD44，CD73，CD90，CD106，CD166，而CD34，CD45则不表达。对LR-MSCs进行了染色体组测序，发现其为正常二倍体（2n=60，XY）。通过对荷斯坦牛LR-MSCs的免疫荧光染色及RT-PCR分析，证明LR-MSCs具有向脂肪，骨，软骨等多种细胞定向分化的能力。这可能为今后的组织工程研究提供了一种新的种子细胞。

• 单位
  中国农业科学院北京畜牧兽医研究所; 首都体育学院