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摘要
【目的】了解陆川猪肌球蛋白轻链2(myosin light chain 2,MYL2)基因CDS区序列及其编码蛋白的结构和功能，探究MYL2基因对肌肉生长发育的影响，为陆川猪的开发利用提供分子基础。【方法】采用RT-PCR技术扩增陆川猪MYL2基因CDS区，利用MegAlign软件对陆川猪MYL2基因与不同物种进行相似性比对和系统进化树构建，并通过生物信息学软件分析MYL2蛋白理化性质、疏水性和跨膜结构等；构建MYL2基因真核表达载体，利用脂质体法将重组质粒转染C2C12细胞并观察荧光；通过实时荧光定量PCR检测MYL2基因在陆川猪不同组织中的表达情况。【结果】陆川猪MYL2基因CDS区全长501 bp,编码166个氨基酸，与NCBI上公布的野猪MYL2基因相似性为99.6%,存在2处突变：156 bp处C突变为T,为同义突变；404 bp处T突变为C,使异亮氨酸(I)突变为苏氨酸(T)。生物信息学分析显示，MYL2蛋白原子总数为2 633个，分子质量为18.879 ku,理论等电点(pI)为4.83,不存在跨膜结构，无信号肽，为非分泌蛋白。MYL2蛋白有16个位点可能会被磷酸化，在第78位氨基酸有1个N-糖基化位点。亚细胞定位结果显示，MYL2蛋白主要存在于细胞质(56.5%)、细胞骨架(21.7%)、线粒体(8.7%)、细胞核(8.7%)和液泡(4.3%)中。MYL2蛋白二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、β-转角和延伸链组成，占比分别为57.83%、29.52%、9.04%和3.61%。细胞试验结果显示，转染48 h后试验组和对照组均有荧光，与对照组相比，试验组MYL2基因表达量极显著升高(P<0.01)。不同组织中MYL2基因表达量由高到低依次为心脏、背最长肌、肝脏、皮下脂肪、肺脏、脾脏和肾脏，且在背最长肌中的表达量显著高于除心脏外的其他组织(P<0.05)。【结论】本试验成功克隆陆川猪MYL2基因CDS区，构建了真核表达载体和组织表达谱，并对其所编码蛋白的结构和功能进行了分析，为探究MYL2基因在肌肉生长发育中的作用及陆川猪的开发利用提供了分子依据。
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