产PVL金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺上皮细胞内质网应激和自噬的影响

作者：海珍珍; 范永鑫; 马小霞; 马海娟; 张东涛; 周学章^*

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2022, 50(07): 1-8.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2022.07.001

• 金黄色葡萄球菌
• PV-杀白细胞素
• 奶牛乳腺上皮细胞
• 内质网应激

【目的】研究产PV-杀白细胞素(Panton-Valentine leukocidin, PVL)金黄色葡萄球菌ATCC49775(产PVL标准菌株)、ΔPVL 49775(PVL基因缺失株)以及体外重组PVL(rPVL)对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, BMECs)内质网应激和自噬的影响，为系统阐述金黄色葡萄球菌及PVL对BMECs损伤的分子机制奠定基础。【方法】用感染复数(MOI)为30的金黄色葡萄球菌菌株ATCC49775和ΔPVL 49775感染BMECs,于感染后3和6 h取样；用100 ng/mL rPVL处理BMECs,于处理后1,3和6 h取样；以未处理的BMECs为对照(CK)。用免疫荧光法检测样品BMECs细胞的自噬体荧光强度；提取样品细胞的总蛋白，以GADPH为内参蛋白，采用Western blot法检测各处理组内质网应激相关蛋白(CHOP和GRP78)和自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、ATG5、Beclin1和p62)的相对表达量。【结果】ATCC49775、ΔPVL 49775感染后不同时间，BMECs自噬体荧光强度均极显著(P<0.01)高于CK,内质网应激相关蛋白(CHOP和GRP78)和自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、ATG5、Beclin1和p62)的表达水平也大多显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于CK;同一处理时间下，ATCC49775感染组自噬体荧光强度和相关蛋白表达水平均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于ΔPVL 49775感染组。rPVL处理后不同时间，BMECs的自噬体荧光强度均极显著(P<0.01)高于CK,内质网应激和自噬相关蛋白的表达水平大多极显著(P<0.01)高于CK。【结论】产PVL金黄色葡萄球菌ATCC49775、ΔPVL 49775以及rPVL均加剧了BMECs的内质网应激和自噬，说明PVL在金黄色葡萄球菌感染BMECs的过程中有重要作用。

• 单位
  生命科学学院; 宁夏大学; 吉林大学