体外诱导羊膜上皮细胞转分化为雌性生殖细胞的初步实验研究

作者：王飞; 刘小菁; 王慧; 吴文超; 郑艾

来源：四川大学学报（医学版）, 2013, 44(03): 357-361.

DOI：10.13464/j.scuxbyxb.2013.03.020

• 羊膜上皮细胞
• 人卵泡液
• 细胞转分化
• 生殖细胞

目的建立体外分离、培养人羊膜上皮细胞(hAECs)的方法,研究其向雌性生殖细胞转分化的潜能。方法体外分离、培养并鉴定hAECs后,采用添加5%人卵泡液的培养基作为诱导剂,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,化学发光免疫技术检测培养基中雌二醇(E2)含量的变化,应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot等方法检测雌性生殖细胞相关基因及蛋白表达水平的变化。结果体外培养hAECs呈多角形,具有上皮细胞特有的铺路石样外观,并表达其特异性细胞角蛋白19(CK19),同时能表达胚胎干细胞(ESC)特异的转录因子POU5f1转录因子4(Oct-4)。采用添加5%人卵泡液的培养基诱导14d后,对照组大部分细胞仍保持上皮细胞的多角形态,而诱导组细胞融合呈集落样生长。E2含量检测结果显示,对照组无E2生成,而诱导组E2水平从第8d开始增加,至第10d达到高峰,然后下降。RT-PCR、Western blot结果表明,诱导组生殖细胞特异性基因生长分化因子9(GDF9)、无精症缺失基因(DAZL)的mRNA表达水平明显升高(P<0.05),而联会复合体蛋白3(SCP3)的mRNA表达水平无明显升高(P>0.05),DAZL的蛋白表达水平亦明显增加(P<0.05)。结论人卵泡液可在体外诱导hAECs向雌性生殖细胞方向转分化。

• 单位
  四川大学华西医院; 四川大学华西第二医院