邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对INS-1细胞氧化应激和凋亡的影响

作者：秦晋; 李奕明; 刘雨薇; 吴岷; 陈波; 厉曙光^*

来源：环境与职业医学, 2019, 36(04): 327-332.

DOI：10.13213/j.cnki.jeom.2019.18635

• 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯
• 胰岛β细胞
• 氧化应激
• 线粒体膜电位
• 细胞凋亡

[目的]邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)是一种具有代表性的邻苯二甲酸酯类增塑剂,常被用于塑料制品的生产加工,暴露来源广泛。有流行病学证据表明DEHP暴露与糖尿病的发生发展有一定关联,但鲜见相关基础研究。本研究探究DEHP对大鼠胰岛β细胞(INS-1细胞)氧化应激及细胞凋亡的影响。[方法]体外培养INS-1细胞,并用30、60、120μmol/L的DEHP处理24 h。用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)含量,可溶性噻唑盐(WST-8)法检测细胞内超氧化物过氧歧化酶(SOD)活性,5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)及氧化型J谷C-胱1检甘测肽(线G粒SS体G膜)含电量位,。硫用代60巴、比12妥0、酸2(TBA40μm)ol法/L检的测DE脂HP质作过用氧于化IN产S-物1细丙胞二醛24(MDA h后,用)含W量es,te用rn blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C(Cyt-C)、Caspase-3、Caspase-9的表达。[结果还] MTT实验和细胞凋亡检测结果显示,DEHP可导致INS-1细胞的增殖抑制,且120μmol/L DEHP会引起凋亡(P<0.05)。与对照组相比,30、60、120μmol/L的DEHP可造成INS-1细胞内ROS荧光强度分别增强13.9%、20.7%和33.7%,MDA含量分别增加42.9%、44.8%和67.7%(P<0.01);60、120μmol/L的DEHP可造成细胞内GSH含量分别下降9.2%和54.8%,GSSG含量分别增加101.2%和444.1%,且还原型与氧化型谷胱甘肽的比值GSH/GSSG分别下降54.8%和91.7%(P的<0.05);120μmol/L 1细的胞D线EH粒P可体膜造电成位SO降D低活,性由降此低引起26红.4%绿(荧P<光0比.05值)分;3别0、降60120μmol/LDEHP可导致INS-低、10.6%、36.8%和38.4%(P<0.01)。Western blot结果显示,与对照组相比,60、120、240μmol/L的DEHP染毒组中,Cyt-C相对表达量增加;120、240μmol/L DEHP组Bax/Bcl-2值升高;240μmol/L DEHP组Caspase-9和Capase-3相对表达量也增加(P<0.05)。[结论] DEHP可引起INS-1细胞氧化应激,降低线粒体膜电位,激活细胞凋亡线粒体通路相关蛋白的表达,诱导细胞凋亡。

• 单位
  公共卫生安全教育部重点实验室