志贺菌毒力大质粒大片段敲除方法的建立

作者：姚毅; 朱力; 马姗姗; 徐慧杰; 冯尔玲; 刘先凯; 贺稚非; 王恒樑

来源：生物技术通讯, 2011, 22(03): 334-338.

• 志贺菌
• 毒力大质粒
• 大片段敲除

目的:构建志贺菌毒力大质粒大片段缺失突变体库。方法:首先利用λ-Red重组系统构建弗氏2a志贺菌301株毒力大质粒特定位点缺失株,再在距离此位点20 kb处缺失另一突变位点,最后根据重组酶识别远端FRT位点的特性,将两个远端FRT位点之间的DNA序列全部缺失。结果:敲除了毒力大质粒24 kb的DNA序列。结论:利用λ-Red重组系统及FLP-FRT位点特异性识别重组系统可以对志贺菌毒力大质粒逐步进行大片段的敲除,构建大质粒大片段缺失突变体库。

• 单位
  西南大学; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院