微小RNA-424-5p调控OTX1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

作者：余昆; 王伟雅; 蔡昕怡; 程先硕; 赵笑枫; 别雅琴; 李强^*

来源：国际肿瘤学杂志, 2019, (06).

• 结直肠肿瘤
• 微RNAs
• 细胞增殖
• OTX1

目的 研究结直肠癌组织中微小RNA-424-5p(miR-424-5p)与orthodenticle人同源盒基因1(OTX1) mRNA表达的关系,并探讨miR-424-5p对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 收集2017年6月至2018年6月在昆明医科大学第三附属医院结直肠外科收治的60例结直肠癌患者,采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测miR-424-5p和OTX1 mRNA在60对结直肠癌组织和癌旁组织以及结直肠癌HCT116细胞中的表达情况,并分析两者表达的相关性。HCT116细胞分别转染miR-NC(miR-NC组)和miR-424-5p-mimic(miR-424-5p-mimic组),采用CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell实验分别检测miR-424-5p对HCT116细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响；Western blotting检测过表达miR-424-5p对OTX1蛋白表达的影响。荧光素酶报告实验检测miR-424-5p对OTX1-3′UTR报告载体荧光素酶活性的影响。结果 OTX1 mRNA在结直肠癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为1.049±0.446和0.639±0.178(t＝－6.583,P<0.001)；miR-424-5p在结直肠癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0.865±0.261和1.329±0.387(t＝7.705,P<0.001),差异均有统计学意义。结直肠癌组织中miR-424-5p和OTX1 mRNA的表达呈负相关(r＝－0.439,P＝0.015)。HCT116细胞转染miR-424-5p-mimic后第72、96和120 h时吸光度(A)值分别为0.813±0.064、0.960±0.098、1.287±0.192,转染miR-NC后第72、96和120 h时A值分别为1.163±0.158、1.645±0.117、2.043±0.236,miR-424-5p-mimic组细胞增殖能力显著低于miR-NC组,差异均具有统计学意义(t＝3.538,P＝0.024；t＝7.778,P＝0.001；t＝4.257,P＝0.013)。划痕实验结果显示,划痕24 h后miR-424-5p-mimic组与miR-NC组相比迁移能力显著减弱。miR-NC组和miR-424-5p-mimic组穿膜细胞数分别为(177.104±17.834)个和(35.667±13.634)个,差异有统计学意义(t＝15.246,P<0.001)。OTX1蛋白在miR-NC组和miR-424-5p-mimic组中的相对表达量分别为0.862±0.121、0.342±0.103,差异有统计学意义(t＝16.286,P<0.001)。荧光素酶实验结果显示,过表达miR-424-5p后,wt-OTX1-3′UTR和mut-OTX1-3′UTR报告载体的荧光素酶活性分别为0.305±0.095和0.898±0.080,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 miR-424-5p与OTX1 mRNA在结直肠癌组织中的表达呈负相关,miR-424-5p可通过下调OTX1的表达抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

• 单位
  云南省肿瘤医院; 昆明医科大学第三附属医院