O型口蹄疫病毒VP1基因原核表达及蛋白纯化

作者：舒黛廉; 王珏; 杜建华

来源：安徽农业科学, 2009, (15): 6876-6878.

• 口蹄疫病毒
• VP1基因
• 原核表达
• 蛋白复性 Foot-and-mouth disease virus
• VP1 gene
• Prokaryotic expression
• Protein renaturation

以O型FMDV重组质粒pMD18T-O-VP1为模板,利用PCR技术扩增得到O型FMDV-VP1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET32a连接构建重组表达载体pET32a-O-VP1,经PCR和测序鉴定后,用IPTG诱导VP1基因的表达,收集不同诱导时间的菌液,进行SDS-PAGE电泳,摸索掌握最佳诱导时间,切取最佳诱导时间电泳胶片做Western-blotting,分析检验表达产物与其抗血清的反应性。结果显示,分子量约为45 ku的蛋白条带反应显著,能被口蹄疫阳性血清识别,表明FMDV-VP1基因在大肠杆菌中得到高效表达,纯化复性的表达蛋白有望开发为诊断抗原和多肽疫苗。

• 单位
  河南牧业经济学院; 郑州大学第一附属医院