CD45RON-糖基化位点对galectin-3结合CD45RO突变体转染细胞的影响

作者：薛婧; 高锡强; 傅春燕; 魏强

来源：基础医学与临床, 2013, 33(09): 1165-1170.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2013.09.011

• 半乳糖凝集素-3
• 结合
• N-糖基化位点
• CD45RO
• JurkatT细胞

目的构建CD45RO不同N-糖基化位点突变的T细胞株,并检测其与galectin-3的结合情况。方法采用N→Q定点突变技术分别去除CD45RO的11个N-糖基化位点,制备单个N-糖基化位点缺失的CD45RO,然后将其导入慢病毒表达载体pWPXL中,11个携带单个N-糖基化位点缺失的CD45RO重组慢病毒质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和MD2.G共转染293T细胞,将包装重组慢病毒感染CD45-的J45.01细胞,流式分选后获得11株分别表达CD45RO单个N-糖基化位点缺失的J45.01 T细胞株。通过RT-PCR和流式细胞术分别从RNA水平和蛋白水平验证CD45RO突变体的转录和表达,应用流式细胞术检测CD45RO突变细胞株与galectin-3的结合情况。结果成功构建了11个CD45RO单个N-糖基化位点缺失的T细胞株,各突变细胞株能稳定表达突变基因,经测序再次证实突变位点正确,CD45RO突变体能稳定表达于细胞表面。galectin-3与N327Q突变细胞的结合明显增强,与N36Q突变细胞和N217Q突变细胞的结合明显减弱。结论 CD45RO N-糖基化位点对galectin-3与CD45RO-J45.01细胞的结合有调节作用。

• 单位
  中国医学科学院医学实验动物研究所; 北京协和医学院; 国家中医药管理局