棉花Gh14-3-3L2基因的分子克隆及其互作蛋白质的初步鉴定

作者：惠颖; 王晋; 孙敬; 刘康; 唐灿明

来源：棉花学报, 2012, 24(04): 285-292.

DOI：10.3969/j.issn.1002-7807.2012.04.001

• 棉花
• 14-3-3
• 蛋白质相互作用
• Pull-down分析 cotton
• protein-protein interaction
• Pull-down assay

根据本实验室蛋白质组学研究鉴定的EST序列,克隆了一个可能在棉花纤维起始和伸长发育阶段起调控作用的棉花14-3-3蛋白质的全长cDNA,定名为Gh14-3-3L2。Gh14-3-3L2蛋白毒性大,难以通过酵母双杂交途径鉴定其互作蛋白质组。因此,本研究首先经原核表达并纯化出添加六联组氨酸标签的Gh14-3-3L2蛋白,以此蛋白质为诱饵,以开花前3 d至开花后6 d正常野生型、徐州142无纤维突变体和Li-1无长绒纤维突变体胚珠或纤维混合蛋白质为猎物样品,采用Pull-down技术分离、富集Gh14-3-3L2相互作用蛋白质,再经2-DE和MALDI-MS/MS串联质谱分析,鉴定了7个可能与Gh1...

• 单位
  作物遗传与种质创新国家重点实验室; 南京农业大学