耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a相互作用蛋白的筛选

作者：原薇薇; 杨杰; 王冬梅; 胡珍; 朱军民; 陈志瑾; 张俊磊; 王嘉丽; 刘佳; 饶贤才

来源：第三军医大学学报, 2010, (08): 749-753.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2010.08.009

• 基因组DNA文库
• PBP2a蛋白
• 细菌双杂交系统
• 蛋白质间相互作用 genomic DNA library
• PBP2a protein
• bacterial two-hybrid system
• protein-protein interaction

目的通过建立细菌双杂交技术,筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白。方法利用PCR扩增,获得PBP2a蛋白转肽酶活性区(TPase)的编码基因,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSA N315株基因组DNA,经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pRAC质粒的BamHⅠ位点,获得基因组DNA表达文库;将文库质粒转化入含诱饵质粒pBR-PBP2a的报告菌株KS1,利用细菌双杂交技术进行筛选,获得与诱饵质粒编码的融合蛋白相互作用的猎物,对猎物中编码序列进行DNA测序和生物信息学分析,确定与PBP2a发生相互作用的蛋白质或多肽。结果成功构建了pBR-PBP2a诱饵质粒,可表达PBP2a...

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学