基于鸡毒支原体黏附素蛋白的表位疫苗制备及免疫效果评价

作者：钟乐苗; 刘秉珲; 吴春琳; 吴异健^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5171-5183.

• 鸡毒支原体
• 黏附素蛋白
• 多表位疫苗
• 原核表达
• 免疫研究

旨在使用鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的黏附蛋白设计一种更安全、有效的多表位候选疫苗。本研究运用生物信息学方法对鸡毒支原体的多个黏附素蛋白(CrmA、GapA、Mgc2、PvpA)的B、T细胞表位进行预测。将筛选的抗原表位合成新的表位基因肽段(命名为mEA)。通过生物学在线软件分析了mEA的二级结构、亲水性、抗原性、三级结构。构建重组质粒pET32a-MG-mEA,经限制性内切酶(BamHⅠ和HindⅢ)酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达和纯化。Western blot验证重组蛋白与鸡MG阴性/阳性血清的反应性。纯化的MG-mEA重组蛋白与佐剂1∶1混匀，制备为多表位疫苗，通过SPF鸡免疫试验分析融合蛋白免疫原性。结果显示，mEA序列二级结构较稳定，抗原性良好。重组质粒经PCR扩增获得1 680 bp大小的目的条带，与预计相符。SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量约48 ku,主要以可溶性形式存在。Western blot试验证明该蛋白反应原性良好。多表位疫苗免疫SPF鸡，经ELISA检测显示：二免后10 d各免疫组抗体水平达到最高，3个重组蛋白免疫组与PBS组相比差异均具有显著统计学意义(P<0.05)。攻菌结果表明，MG感染明显损伤了气管黏膜结构，而重组蛋白+佐剂制备的疫苗能够有效保护MG的损伤。综上，本研究结果为研制安全有效的候选MG疫苗提供了新的途径。

• 单位
  动物科学学院; 福建农业职业技术学院; 福建农林大学