利用iCaspase9特异性诱导鸡原始生殖细胞消除的研究

作者：孙玲玲; 黄振文; 田奎; 张嘉乐; 郑基坛; 濮黎萍; 陆阳清^*

来源：南方农业学报, 2023, 1-11.

• 鸡
• 原始生殖细胞
• iCaspase9
• 消除效果

【目的】鸡原始生殖细胞((Primordial germ cell，PGC)介导法是制备基因编辑鸡的有效方法。为提升体外培养和基因操作后移植PGC生殖系的遗传比率，利用iCaspase9系统诱导细胞凋亡的特性，将iCaspase9插入到DAZL基因座中，实现该基因在鸡原始生殖细胞的特异性表达和消除。【方法】利用piggyBac转座酶将iCaspase9整合到鸡的基因组中，构建稳定转染iCaspase9基因的CAG-iCaspase9-mCherry DF-1细胞系，检测其在iCaspase9系统诱导底物B/B二聚化配体(引导iCaspase9二聚化诱导含该系统的载体凋亡)作用下的细胞消除效果；再利用CRISPR/Cas9将iCaspase9基因定点插入到DAZL基因的11号外显子之后，构建Dazl-iCaspase9-EGFP PGC细胞系，进行基因插入的鉴定和PGC的特性鉴定，检测其在B/B二聚化配体诱导下的消除效果。【结果】成功建立CAG-iCaspase9-mCherry DF-1细胞系，与野生型DF-1细胞的生长增殖无显著差异。CCK8法测定0.25-5 nmol/L B/B二聚化配体对细胞活力无显著影响，野生型DF-1细胞添加B/B二聚化配体后与无添加组的生长增殖无显著差异，而CAG-iCaspase9-mCherry DF-1细胞添加B/B二聚化配体即可实现DF-1高效消除，优化浓度为0.25 nmol/L；成功建立Dazl-iCaspase9-EGFP PGC细胞系，靶位点两端PCR结果显示成功插入iCaspase9基因，RT-PCR和免疫荧光染色结果都显示该细胞系仍具有鸡原始生殖细胞的特性，在添加0.25 nmol/L的B/B二聚化配体的作用下，PGC也被显著消除。【结论】成功获得Dazl-iCaspasse9-EGFP PGC细胞系，表明利用iCaspase9系统可实现鸡原始生殖细胞的特异性消除，为建立特异高效PGC细胞移植受体鸡模型奠定了基础。

• 单位
  广西大学