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摘要
为优化草鱼(Ctenopharyngodon idella)鳔细胞(CiSB)细胞悬浮培养工艺，以提高基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)含量，利用Cytodex 1微载体悬浮培养系统规模化培养CiSB和Ⅱ型GCRV,对CiSB细胞初始接种密度、搅拌转速和微载体浓度等工艺参数进行摸索和优化。结果显示，在CiSB细胞贴壁期，以转速30 r·min-1、每静置30 min搅拌2 min的间歇搅拌方式培养最佳，4 h后细胞贴附率可达96%以上；在微载体密度2 g·L-1、细胞初始接种密度2×105个·mL-1、搅拌速度30 r·min-1的条件下，初始培养血清浓度设定为10%,培养3 d后更换50%的培养基并使血清浓度达到5%,可获得最佳的细胞生长效能。CiSB经消化转移放大至1 L,微载体上细胞贴附均匀、生长良好。接种Ⅱ型GCRV至规模化培养的CiSB细胞，拷贝数最高达6.2×105拷贝数·μL-1。研究结果可为草鱼出血病疫苗的规模化生产工艺研究提供依据。
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