环状RNA BRAF＿2在子痫前期胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制

作者：张玉月; 朱亚飞; 高丽娜; 殷荷; 马朝霞; 吴玉珠; 王艳华; 吴凯; 张慧萍^*

来源：解放军医学杂志, 2023, 48(04): 374-382.

• 子痫前期
• circRNA
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• miRNAs

目的 探讨环状RNABRAF＿2(circRNABRAF＿2)在子痫前期(PE)胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 收集2018年1月-2019年2月宁夏医科大学总医院正常妊娠与PE孕妇的胎盘组织(n=21)，采用qRTPCR检测两组胎盘组织中circRNABRAF＿2的表达水平，并分析circRNABRAF＿2表达水平与血压的相关性。体外培养人源胎盘滋养细胞株(HTR8-S/Vneo):(1)将细胞分为对照组与缺氧组，采用qRT-PCR检测circRNA BRAF＿2的表达；(2)在HTR8-S/Vneo中转染circRNABRAF＿2慢病毒空载体和过表达慢病毒，分为对照组、circRNABRAF＿2阴性对照组及circRNA BRAF＿2过表达组，使用qRT-PCR对circRNA BRAF＿2进行过表达验证；(3)在circRNA BRAF＿2过表达慢病毒转染成功的基础上，将细胞分为对照组、circRNA BRAF＿2阴性对照组、circRNA BRAF＿2过表达组、缺氧组、缺氧+circRNABRAF＿2阴性对照组与缺氧+circRNABRAF＿2过表达组，采用EdU和CCK-8法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡水平，Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2及Bax的表达。采用qRT-PCR检测circRNABRAF＿2在HTR8-S/Vneo细胞质和细胞核中的表达水平，通过生物信息学分析筛选与circRNABRAF＿2可能结合的miRNA并检测其在组织和细胞中的表达水平。结果 与正常妊娠组比较，PE组孕妇胎盘组织中circRNA BRAF＿2表达水平明显降低(P<0.001)，且circRNA BRAF＿2表达水平与收缩压、舒张压呈负相关(r=±0.4531,P<0.01;r=±0.4381,P<0.01)。qRT-PCR检测结果显示，与对照组比较，缺氧组circRNABR AF＿2表达水平明显降低(P<0.01)。circRNA BRAF＿2阴性对照组circRNA BRAF＿2表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；与circRNA BRAF＿2阴性对照组比较，circRNA BRAF＿2过表达组circRNA BRAF＿2表达水平明显升高(P<0.001)。EdU及CCK-8法检测结果显示，与对照组比较，缺氧组EdU阳性细胞百分比明显下降(P<0.001)，滋养细胞增殖能力降低(P<0.001)；与缺氧+circRNA BRAF＿2阴性对照组比较，缺氧+circRNA BRAF＿2过表达组滋养细胞EdU阳性细胞百分比明显升高(P<0.001)，滋养细胞增殖能力明显增强(P<0.001)。流式细胞术检测结果显示，与对照组比较，缺氧组细胞凋亡率明显增高(P<0.001)；与缺氧+circRNABRAF＿2阴性对照组比较，缺氧+circRNABRAF＿2过表达组细胞凋亡率明显降低(P<0.001)。Westernblotting检测结果显示，与对照组比较，缺氧组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白表达水平升高(P<0.01或P<0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01)；与缺氧+circRNA BRAF＿2阴性对照组比较，缺氧+circRNA BRAF＿2过表达组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白表达水平降低(P<0.001或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示，circRNA BRAF＿2主要在细胞质中表达，生物信息学分析结果显示，circRNA BRAF＿2与miR-7855-5p存在结合位点。qRT-PCR检测结果显示，与正常妊娠组比较，miR-7855-5p在PE胎盘组织中高表达(P<0.05)；与对照组细胞比较，缺氧组miR-7855-5p明显高表达(P<0.001)。结论 circRNA BRAF＿2可促进PE胎盘滋养细胞增殖并抑制其凋亡，作用机制可能与miR-7855-5p有关。

• 单位
  宁夏医科大学总医院; 宁夏医科大学; 基础医学院