宿主分子Tyro3与猪瘟病毒E2蛋白相互作用并促进病毒的复制

作者：屈亮; 郑光来; 于少雄; 仇华吉; 李素

来源：中国预防兽医学报, 2021, 1-7.

• Tyro3
• TAM受体
• 猪瘟病毒

前期研究发现TAM受体成员Mertk为CSFV的侵入因子。为研究TAM受体家族另一成员Tyro3对CSFV复制的影响，本研究设计并合成了针对Tyro3的siRNA，将siTyro3转染PK-15细胞，下调细胞中Tyro3蛋白的表达后以MOI 0.01 CSFV-SM感染PK-15细胞，通过荧光定量PCR及间接免疫荧光检测CSFV复制情况，结果显示下调Tyro3表达能够抑制CSFV的复制。另外按常规方法包装制备Tyro3慢病毒Lenti-Tyro3-HA，将其转导PK-15细胞，传代后经荧光显微镜观察可见PK-Tyro3-HA含有明显的绿色荧光；利用western blot检测结果显示PK-Tyro3-HA可检测到Tyro3特异性条带；荧光定量PCR结果显示PK-Tyro3-HA细胞系中Tyro3基因的转录水平与对照组相比显著上升（P<0.001），表明获得了稳定表达Tyro3蛋白的PK-15细胞系。进一步将CSFV-SM分别以MOI 1和0.1感染PK-Tyro3-HA细胞系，经荧光定量PCR检测，结果显示过表达Tyro3后能够促进CSFV的复制。将不同剂量的兔源抗Tyro3 pAb与PK-15细胞共孵育，封闭PK-15细胞表面Tyro3表位后感染rCSFV-Rluc，经海肾荧光素酶检测，结果显示抗Tyro3多克隆抗体能够抑制CSFV的复制，并呈剂量依赖性。将pCAGGS-Tyro3-HA分别与pCAGGS-E2-Flag、pCAGGS-Erns-Flag各2 μg共转染HEK293T 48h后，进行免疫共沉淀试验，结果显示Tyro3与CSFV E2囊膜糖蛋白具有相互作用。综上，本研究首次证实Tyro3通过与CSFV E2囊膜糖蛋白相互作用促进CSFV在PK-15细胞中的复制。本研究为进一步揭示CSFV与宿主相互作用提供参考依据。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室