人心肌肌酸激酶MB同工酶的原核表达及纯化

作者：李子颖; 贾娟娟; 刘一兵; 韩世泉

来源：中国生物制品学杂志, 2013, (07): 931-934.

DOI：10.13200/j.cjb.2013.07.40.lizy.024

• 心肌
• 肌酸激酶
• 同工酶
• 原核细胞
• 基因表达
• 纯化 Cardiac muscle
• Creatine kinase
• Isoenzyme
• Prokaryotic cells
• Gene expression
• Purification

目的原核表达并纯化人心肌肌酸激酶MB同工酶(creatine kinase MB,CK-MB)。方法分别从含CK-M、CK-B基因片段的质粒SC319293和SC119007中扩增CK-M、CK-B基因,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,经GST亲和层析柱纯化后,ELISA法检测其抗原性。结果重组表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达的重组CK-MB蛋白相对分子质量约110 000,表达量占菌体总蛋白的57%,主要以包涵体形式存在;纯化的CK-MB蛋白纯度大于90%,...

• 单位
  中国原子能科学研究院; 中国食品药品检定研究院