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摘要
目的 利用真核表达系统制备非洲猪瘟病毒（ASFV）CD2v分子N端胞外区融合蛋白，并作为抗原免疫和筛选特异性识别CD2v单克隆抗体。方法 以pcDNA3.1-CD2v-HA质粒（含ASFV-BA71v株EP402R基因全长编码序列和HA标签）为模板，扩增CD2v蛋白胞外区碱基序列，构建真核表达载体pcDNA3.1-N-CD2v-His，通过Expi-293表达系统获得重组N-CD2v-His蛋白。将纯化后的蛋白免疫小鼠，利用杂交瘤细胞技术制备特异识别CD2v分子单克隆抗体，对获得的抗体经酶联免疫吸附实验（ELISA）、Western印迹以及间接免疫荧光等方法进行鉴定。结果N-CD2v-His融合蛋白基因被成功构建到真核表达载体上，转染Expi-293F细胞收获重组蛋白，纯蛋白经SDS-PAGE分析发现，N-CD2v-His融合蛋白条带呈高度糖基化修饰的梯状分布。用该融合蛋白免疫小鼠，经杂交瘤细胞筛选，获得2株高亲合活性单克隆抗体，2株抗体经间接ELISA、Western印迹及免疫荧光实验等检测均能特异识别糖基化修饰的CD2v全长蛋白。结论 成功制备了抗CD2v特异性单克隆抗体，为进一步开发新型ASFV抗原检测或治疗方法奠定了基础。
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单位内蒙古医科大学; 药物研究所
