PMS2通过ERK/ERCC1通路对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

作者：黄雪茹; 丁绪浩; 陈素贤; 谭琦; 吴月明; 牛晓敏; 王亚帝^*; 佟青^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2023, 49(04): 931-940.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20230414

• 结肠肿瘤
• SW480细胞
• 减数分裂后分离蛋白2
• 切除修复交叉互补组1
• 细胞外调节蛋白激酶1/2
• 信号通路

目的：探讨减数分裂后分离蛋白2 (PMS2)表达对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响，阐明PMS2与切除修复交叉互补组1 (ERCC1)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号转导通路的关系。方法：将PMS2 siRNA质粒和PMS2过表达质粒分别转染入结肠癌SW480细胞(分别为PMS2敲减组和PMS2过表达组)，同时设PMS2敲减对照组(siRNA-NC组)和PMS2过表达对照组(PMS2 control组)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中PMS2 mRNA表达水平，Western blotting法检测各组细胞中PMS2蛋白表达水平，CCK-8法检测各组细胞增殖活性，细胞划痕实验检测各组细胞迁移率，Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数，流式细胞术检测顺铂作用后各组细胞凋亡率。通过String数据库，对PMS2、ERCC1和ERK上下游蛋白的关系进行生物信息学分析。SW480细胞分别采用3条siRNA进行PMS2和ERCC1敲减，采用RT-qPCR法验证PMS2与ERCC1的相互作用，采用Western blotting法检测各组细胞中PMS2、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平。结果：RT-qPCR法和Western blotting法检测，PMS2基因敲减和过表达细胞模型构建成功。与siRNA-NC组比较，PMS2敲减组细胞增殖活性和细胞迁移率明显升高(P<0.05或P<0.01)，侵袭细胞数明显增加(P<0.01)，顺铂作用后细胞凋亡率明显降低(P<0.01)；与PMS2 control组比较，PMS2过表达组细胞增殖活性和细胞迁移率明显降低(P<0.01)，侵袭细胞数明显减少(P<0.01)，顺铂作用后细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。蛋白-蛋白互作(PPI)富集P值为2.09e-07，包含ERCC1和ERK1/2等相互作用节点数共有13个，提示PMS2、ERCC1和ERK1/2之间可能存在调控作用。与siRNA-NC组比较，各PMS2敲减组细胞中ERCC1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)；与siERCC1-NC组比较，各ERCC1敲减组细胞中PMS2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与siRNA-NC组比较，PMS2敲减组细胞中PMS2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)；与PMS2 control组比较，PMS2过表达组细胞中PMS2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论：PMS2表达可影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和抗凋亡能力。PMS2与ERCC1存在互相作用关系，并可通过调节ERCC1参与ERK信号转导通路。

• 单位
  锦州医科大学