新基因hSSB1逆转录病毒载体的构建、鉴定和稳定株的筛选

作者：张如华; 徐双兵; 武远众; 康铁邦

来源：中山大学学报(自然科学版), 2012, 51(02): 73-76+85.

• hSSB1
• 病毒载体
• 稳定株 hSSB1
• retroviral vector
• stable cell line

hSSB1(Human Single-strand DNA-binding protein)是参与细胞DNA损伤应答的一个重要信号分子。根据GenBank提供的hSSB1基因序列扩增其cDNA序列,插入到pBABE逆转录病毒载体中,连接后的质粒转化后经过双酶切,PCR扩增及测序来鉴定pBABE-hSSB1阳性克隆。将阳性表达的pBABE-hSSB1和包装质粒转染到HEK293T细胞中,产生病毒液。将包装好的病毒感染细胞并用嘌呤霉素(puromycin)筛选稳定表达hSSB1的细胞株。重组pBABE-hSSB1质粒经双酶切,PCR扩增鉴定及DNA测序分析等方法证实克隆成功。Western blo...

• 单位
  华南肿瘤学国家重点实验室; 中山大学肿瘤防治中心