重组人骨形态发生蛋白9和2体外诱导成骨的活性分析

作者：甘强; 胡侦明; 郝杰; 江维; 沈皆亮; 王大武; 钟小明; 方剂

来源：激光杂志, 2012, 33(04): 70-72.

DOI：10.3969/j.issn.0253-2743.2012.04.035

• 人骨形态发生蛋白9
• 真核表达
• 纯化蛋白
• 骨诱导
• C3H10 bone morphogenetic protein 9
• eukaryotic expression
• purified protein
• osteoinduction
• C3H10

利用PCR扩增hBMP-9全长序列构建真核表达载体pcDNA4/His Max-BMP-9,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有100μg/ml博来霉素的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-9的表达量。经过细胞分离培养,得到稳定表达rhBMP-9的6株单克隆细胞株,ELISA法检测rhBMP-9表达水平,最高可达1.13μg/24h/106cells。收集最高表达蛋白的单克隆株培养基上清,经His标签的蛋白纯化柱纯化,冻干法浓缩得到100μg/ml的rhBMP-9。用浓度100μg/ml的rhBMP-9和rhBMP-2分别刺激培养C3H...

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院