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摘要
本研究采用L16(43)正交试验设计，优化了朝鲜淫羊藿ISSR-PCR反应体系中的模板DNA加入量、引物加入量、2×Taq Master Mix加入量3个参数，建立了最佳反应体系。采用优化后的反应体系，从100条ISSR引物中筛选出7条多态性引物，并对每条引物的退火温度逐个优化。试验结果表明朝鲜淫羊藿ISSR-PCR最佳反应体系为：3 μL模板DNA （8.7 ng/μL），3.5 μL引物（2.5 umol/L），12 μL 2×Taq Master Mix，双蒸水补足至体积为20 μL。PCR扩增步骤：在94 ℃条件下先预变性4 min，后变性1 min，于57 ℃退火，72 ℃延伸均进行40 s，共循环35次，然后于72 ℃下补齐5 min，产物保存在4 ℃冰箱。经验证表明该反应体系稳定，引物条带清晰且多态性良好，该研究为朝鲜淫羊藿的群体遗传学研究奠定了前期基础。
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