整合siRNA技术的结核核酸疫苗的AAV载体构建与浓缩纯化

作者：朱伟; 曹以诚; 杨磊

来源：现代食品科技, 2011, (07): 802-806+755.

DOI：10.13982/j.mfst.1673-9078.2011.07.006

• 腺病毒相关病毒载体系统
• 结核疫苗
• RNA干扰技术 AAV
• Tuberculosis DNA Vaccine
• RNAi

引进腺病毒相关病毒载体系统(AAV载体系统),并通过PCR、酶切、连接等分子克隆手段将之前对于结核研究的成果转移至该系统中,完成同时具备小干扰RNA(si-Mcl-1)和结核融合抗原(AG85B-ESAT6)表达单位的二重表达载体的构建。转染AAV-293细胞,包装重组AAV病毒颗粒(rAAV)并收集病毒。分别设计另外两组rAAV表达载体:rAAV-EGFP与rAAV-siEGFP-EGFP。两组表达载体转染AAV-293包装病毒并感染HT1080细胞。荧光显微镜检测,感染后HT1080细胞48 h后表达荧光蛋白,证明病毒包装成功。通过流式细胞仪检测,前者荧光表达占总细胞2.78%,后者荧光表...

• 单位
  华南理工大学