运动神经元特异性荧光报告系统的建立

作者：江政云; 陈敏; 张焜^*

来源：生物工程学报, 2021, 37(11): 4095-4101.

DOI：10.13345/j.cjb.210006

• 运动神经元
• 诱导多能干细胞
• 细胞分化
• 神经干细胞

人类诱导多能干细胞(Human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)具有向人体多种类型细胞分化的潜能,其定向分化的运动神经元(Motor neurons,MNs)是众多运动神经元疾病的重要体外模型之一。为简化MNs的鉴定方法,通过慢病毒载体将MNs特异性启动子HB9及其控制下的红色荧光蛋白(Redfluorescentprotein,RFP)基因转入hiPSCs分化而来的神经干细胞(Human neural stem cells,hNSCs),经抗生素筛选,获得稳定的阳性细胞株hNSCs-HB9-RFP-Puro。而后,阳性细胞株感染过表达MNs定向分化转录因子的慢病毒LV-Ngn2-Sox11-GFP和LV-Isl1-Lhx3-Hygro,诱导MNs定向分化。诱导分化所得的细胞展现出神经元样结构,并在特异性启动子HB9的作用下表达RFP;同时也表达神经元相关标记物β微管蛋白(β-tubulin)和乙酰胆碱转移酶(Cholineacetyltransferase,ChAT),鉴定为成熟的MNs。该荧光报告系统为MNs的定向分化及鉴定提供了一个更加直观的方法,有效促进了MNs在疾病模型和药物筛选等领域的广泛应用。

• 单位
  广东工业大学; 五邑大学; 医药学院; 江门市大健康国际创新研究院