基于NMDAR调控线粒体自噬探讨滋肾活血方对血管性痴呆大鼠海马氧化应激损伤的保护作用

作者：赵梓婷; 张秀丽; 刘桐赫; 施佳仪; 向韵; 周梓洋; 谢乐; 刘芳; 曾珊珊; 杨瑾昱; 伍大华^*; 曾晶

来源：北京中医药大学学报, 2023, 46(08): 1128-1138.

• 滋肾活血方
• N-甲基-D-天冬氨酸受体
• 氧化应激
• 线粒体自噬
• 海马
• 大鼠

目的 探讨滋肾活血方通过调节N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)促进线粒体自噬，从而减轻血管性痴呆(VD)大鼠海马氧化应激损伤的分子机制。方法 采用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠VD模型。60只雄性SD大鼠根据随机数字表法分为假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组(0.45 mg/kg)、滋肾活血方低剂量组(8.9 g/kg)、滋肾活血方中剂量组(17.8 g/kg)、滋肾活血方高剂量组(35.6 g/kg),每组10只。灌胃给药14 d。通过水迷宫实验对各组大鼠的学习记忆能力进行评估。50只雄性SD大鼠根据随机数字表法分为假手术组、模型组、马来酸氢盐(MK-801)组(1 mg/kg)、滋肾活血方高剂量组(35.6 g/kg)、滋肾活血方高剂量联合MK-801组(35.6 g/kg+1 mg/kg),每组10只。MK-801组在造模后连续7 d腹腔注射MK-801,滋肾活血方高剂量联合MK-801组灌胃高剂量滋肾活血方联合腹腔注射MK-801。灌胃给药14 d。蛋白质印迹法检测PTEN诱导假定激酶1(PINK1)/帕金森病相关蛋白(Parkin)信号通路相关蛋白[PINK1、Parkin、抗增殖蛋白2(PHB2)、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、泛素结合蛋白p62]表达，免疫荧光法检测海马PINK1、神经元特异性烯醇化酶(NSE)平均荧光强度，酶联免疫吸附测定检测海马丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量，实时荧光PCR及蛋白质印迹法检测大鼠海马NMDAR2A(NR2A)、NMDAR2B(NR2B)mRNA及NR2B蛋白表达。结果 水迷宫实验结果表明，与假手术组相比，模型组逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05);与模型组相比，盐酸多奈哌齐组与滋肾活血方低、中、高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05,P<0.01),盐酸多奈哌齐组与滋肾活血方中、高剂量组穿越平台次数增加(P<0.05,P<0.01)。进一步研究表明，与模型组相比，滋肾活血方高剂量组大鼠海马Parkin、PINK1、PHB2、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加(P<0.01),p62蛋白表达减少(P<0.01),PINK1、NSE平均荧光强度增强(P<0.05,P<0.01),SOD含量增加(P<0.01),MDA含量减少(P<0.01);MK-801组大鼠海马Parkin、PINK1、PHB2及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达减少(P<0.01),p62蛋白表达增加(P<0.01),PINK1、NSE平均荧光强度减弱(P<0.05,P<0.01),SOD含量减少(P<0.05),MDA含量增加(P<0.01)。与MK-801组相比，滋肾活血方高剂量联合MK-801组大鼠海马Parkin、PINK1、PHB2、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加(P<0.01),p62蛋白表达减少(P<0.01),PINK1、NSE平均荧光强度增强(P<0.05,P<0.01),SOD含量增加(P<0.01),MDA含量减少(P<0.01),NR2B mRNA及蛋白表达增加(P<0.01)。结论 滋肾活血方可能通过NR2B介导的PINK1/Parkin信号通路调节线粒体自噬，从而改善VD大鼠海马神经元氧化应激损伤。

• 单位
  湖南中医药大学第一附属医院; 湖南省中医药研究院附属医院; 湖南中医药大学