苦参碱逆转人结肠癌干细胞化疗耐药作用及相关机制研究

作者：苏建伟; 周喜汉^*; 叶颖霞; 蒋旗

来源：现代免疫学, 2020, 40(06): 454-464.

• 苦参碱
• 结肠癌
• 化疗耐药
• P-糖蛋白
• 磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路

为探讨苦参碱(matrine,MT)逆转人结肠癌HCT116/5-Fu细胞化疗耐药作用及调控磷酸肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的机制,采用MTT法检测HCT116/5-Fu细胞对5-氟尿嘧啶(5-fuorouracil,5-Fu)的耐药性并确定MT对HCT116/5-Fu细胞的最大无毒浓度(maximum non-toxic concentration,TC0)(抑制率<10%)。将TC0倍比稀释3个浓度,分别为MT高、中、低组,观察MT作用前后HCT116/5-Fu细胞耐药性的变化。采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,进一步采用实时荧光定量PCR及Western blotting分别检测ABCB1基因及磷酸化PI3K(phospho-PI3K,p-PI3K)、磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)、磷酸化mTOR(phospho-mTOR,p-mTOR)、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果显示,HCT116/5-Fu细胞对5-Fu的耐药指数为14.53,MT高、中、低组对HCT116/5-Fu细胞化疗耐药逆转指数分别为3.01、1.84、1.27,且MT可改变化疗药5-Fu中HCT116/5-Fu细胞的生存状态;MT各组HCT116/5-Fu细胞的凋亡率分别为(42.41±1.43)%、(23.76±0.47)%、(12.29±0.18)%,显著高于耐药组(P<0.01);MT可显著降低ABCB1耐药基因和P-gp的表达,并下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达(P<0.05)。提示MT可逆转人结肠癌HCT116/5-Fu细胞的化疗耐药,这可能与其降低ABCB1耐药基因和P-gp表达,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,促进细胞凋亡有关。

• 单位
  右江民族医学院附属医院