PEGFP-C1-PHF6质粒的构建和鉴定

作者：明平红; 唐发清; 王少敏; 刘志刚; 谢圣高; 宁勇; 涂建成

来源：武汉大学学报(医学版), 2014, 35(05): 757-760.

DOI：10.14188/j.1671-8852.2014.05.066

• PHF6
• PEGFP-C1
• 重组质粒

目的:构建含有PHF6基因的PEGFP-C1-PHF6重组质粒并对重组质粒进行鉴定,为进一步研究其在核仁中的定位和功能奠定基础。方法:野生型293细胞中提取总RNA,反转录为cDNA后采用聚合酶链反应从总cDNA中扩增出PHF6基因,上下游分别引入EcoRⅠ及BamHⅠ酶切位点,双酶切后将其插入PEGFP-C1质粒中,构建PEGFP-C1-PHF6重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌DH5α进行克隆,提取质粒进行酶切和测序鉴定。脂质体法转染重组质粒至Hela细胞株中,Western blot检测PHF6基因蛋白的表达情况。结果:重组质粒经限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定及DNA测序鉴定结果均证实PHF6基因已正确克隆到PEGFP-C1载体中,Western blot结果进一步证实PEGFP-C1-PHF6重组质粒构建正确。结论:成功并正确构建PEGFP-C1-PHF6重组质粒。

• 单位
  武汉大学中南医院; 湖北省孝感市中心医院; 湖北中医药大学; 广东省珠海市人民医院