太子参芜菁花叶病毒和蚕豆萎蔫病毒的双重RT-PCR检测

作者：匡云波; 陈满足; 陆伊荣; 陈晶; 叶祖云

来源：园艺学报, 2017, 44(04): 784-791.

DOI：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0940

• 太子参
• 芜菁花叶病毒
• 蚕豆萎蔫病毒
• 双重RT-PCR

针对不同产地栽培的太子参(Pseudostellaria heterophylla)中主要存在芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,Tu MV)和蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)侵染且为害严重的情况,建立能同时检测这2种病毒的双重RT-PCR快速检测方法。根据Gen Bank数据库中的Tu MV、BBWV外壳蛋白(coat protein,CP)基因核苷酸序列的保守区域分别设计简并引物,在单一RT-PCR检测体系的基础上,建立和优化双重RT-PCR检测体系。双重RT-PCR的优化结果显示,最佳扩增循环数为35,最佳引物浓度为0.4μmol·L-1,最佳退火温度为51℃。其灵敏度测定结果显示,2种病毒在样品c DNA稀释至原液的10-4倍后仍能扩增出特异条带。应用该方法对7份栽培太子参样品和4份脱毒苗样品进行了检测,结果表明,建立的双重RT-PCR检测方法可稳定、准确、灵敏地同时检测Tu MV和BBWV。

• 单位
  宁德师范学院