油茶ISSR反应体系建立及优化

作者：温强; 叶金山; 雷小林; 江梅; 黄莉莉; 江香梅; 徐林初

来源：中南林学院学报, 2006, (06): 22-26+43.

• 林学
• 油茶
• ISSR
• 反应条件
• 优化

以改进的CTAB高盐法提取油茶嫩叶总DNA,进行简单重复序列间扩增(ISSR)分析,分别测试了退火温度、模板DNA浓度、M g2+浓度、dNTP s浓度、T aqDNA聚合酶用量和是否加入去离子甲酰胺对反应结果的影响.油茶ISSR分析的最适反应体系为:在20μL PCR反应体积中,含20 ng模板DNA,2.5 mm o l.L-1M gC l2,0.2 mm o l.L-1dNTP s,1UT aqDNA聚合酶,0.5pm o l.μL-1引物,1%去离子甲基酰胺.扩增程序为:94℃预变性2 m in;94℃变性30 s,52℃退火30 s,72℃延伸90 s,反应38个循环;最后在72℃延伸7 m in.

• 单位
  江西省植物生物技术重点实验室