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摘要
酶标抗体的稳定性对酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)至关重要,但常规化学偶联方法制备的酶标抗体具有热稳定性不足的缺点,这限制了酶标抗体在ELISA中的应用。本研究利用基因工程技术克隆表达出碱性磷酸酶与特异性鲨鱼单域抗体的融合蛋白,并对融合蛋白的亲和力和热稳定性进行了研究。结果表明:在16℃下,0.05 mmol/L的异丙基β-D-1-硫代半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导可实现融合蛋白的可溶性表达,表达出的融合蛋白分子量约为63 kDa,与目标抗原的亲和常数可达7.80×10-8 mol/L,具有良好的抗原结合能力;融合蛋白在58℃处理180 min后热稳定性良好,证明该融合蛋白可以作为ELISA检测中一种潜在的免疫诊断剂。
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