摘要
目的:探究p53对核仁应激诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法:体外培养SKOV3细胞,根据实验药物不同分成4个实验组:control组、BMH-21(核仁应激诱导剂)组、pifithrin-α(PFT-α;p53抑制剂)+BMH-21组和RG7112(抑制p53降解并激活p53通路)+BMH-21组。MTT法检测细胞活力;免疫荧光染色检测细胞中p53蛋白定位和表达水平,以及BMH-21诱导的核仁应激的发生;Western blot法检测蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:MTT结果显示,BMH-21组细胞活力比control组显著下降(P<0.01),PFT-α+BMH-21组细胞活力与BMH-21组相比无显著变化(P>0.05),而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著下降(P<0.01);荧光显微镜观察发现,BMH-21组p53蛋白表达水平比control组显著升高,PFT-α+BMH-21组p53蛋白表达水平比BMH-21组显著降低,而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高,且大部分入核堆积;Western blot结果显示,BMH-21组p53蛋白及线粒体途径凋亡相关蛋白表达水平比control组显著升高(P<0.01),PFT-α+BMH-21组p53蛋白表及线粒体途径凋亡相关蛋白表达水平比BMH-21组显著降低(P<0.05),而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高(P<0.01);流式细胞术结果显示,BMH-21组细胞凋亡率比control组显著升高(P<0.01),PFT-α+BMH-21组细胞凋亡率与BMH-21组相比无显著变化(P>0.05),而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高(P<0.01)。结论:BMH-21诱导人卵巢癌SKOV3细胞发生核仁应激时,抑制p53对细胞凋亡无明显影响,而激活和稳定p53会促进细胞凋亡。
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单位吉林医药学院