青海血蜱重组rHq002蛋白包涵体的纯化

作者：马静; 陈开廷; 曹美娜; 刘玉婷; 马婧; 高金亮^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(01): 91-94+99.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003521

• 蜱源蛋白质
• 包涵体
• 复性
• 纯化

目的对青海血蜱重组r Hq002蛋白包涵体进行复性及纯化。方法将重组质粒pET-30a-Hq002转化E. coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组Hq002蛋白;超声破碎菌体,收集细胞碎片,用PBS缓冲液和低浓度尿素进行多次洗涤;洗涤后的包涵体用6 mol/L盐酸胍溶解,稀释法进行蛋白复性;用镍离子亲和层析法纯化蛋白后,分别于4和-20℃保存7 d后进行12%SDS-PAGE鉴定。结果经PBS缓冲液和低浓度尿素多次洗涤,可去除大量的水溶性杂质和部分水不溶性杂蛋白,初步纯化了包涵体;包涵体经6 mol/L盐酸胍溶解后可直接稀释复性重组蛋白;经镍离子亲和层析纯化后的蛋白相对分子质量约27 000,与预期相符,4和-20℃保存7 d未出现降解或者聚集。结论成功获得含二硫键的蜱源重组蛋白,本研究的复性纯化方法可为纯化包涵体蛋白提供参考。

• 单位
  包头医学院; 鄂尔多斯市中心医院