星形胶质细胞重编程诱导为神经细胞的实验研究

作者：宋泽武; 王希; 赵浥; 石晶; 李立新^*

来源：临床神经外科杂志, 2021, 18(03): 305-309.

• 小分子物质
• 星形胶质细胞
• 神经细胞
• 重编程

目的研究在体外星形胶质细胞重编程诱导为神经细胞的方法。方法在体外培养出生1～4 d大鼠幼仔皮层脑组织来源的星形胶质细胞。在24孔板中将提纯、鉴定过的第三代星形胶质细胞培养在聚D-赖氨酸涂层的盖玻片上,并分为诱导组与对照两组。诱导组:将Y-27632(0.5μmol/L)、VPA(0.5μmol/L)、SB431542(94 nmol/L)、Rep Sox(25μmol/L)这4种小分子溶入二甲基亚砜(DMSO),再加入培养基中,最终达到0.5μmol/L,0.5μmol/L,94 nmol/L,25μmol/L的终浓度,孵育星形胶质细胞7 d;对照组:加入相同体积的DMSO。诱导组细胞使用小分子物质孵育7 d后,更换含有生长因子BDNF、NT-3的神经元培养基培养14 d,对照组细胞于7 d后,更换同样含有生长因子BDNF、NT-3的神经元培养基培养14 d。14 d后光镜下观察各组细胞的形态变化;并采用细胞免疫荧光检测神经元标志物TUJ1、MAP2及Neu N的表达。结果诱导组星形胶质细胞经过小分子物质重编程诱导7 d并加入神经元培养基14 d后,光镜下观察发现大部分细胞形态发生改变,饱满的胞质变得细长,有多个突起伸出且突起较长;免疫荧光检测示,神经元标志物TUJ1、MAP2及Neu N表达阳性细胞的比例(15.6%±0.7%)明显高于对照组(3.2%±0.3%),差异有统计学意义(P <0.05)。结论小分子化合物Y-27632、VPA、SB431542、Rep Sox可以将星形胶质细胞直接重编程诱导为神经细胞。

• 单位
  南京医科大学第一附属医院