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摘要
牛鼻病毒(BRV)是引起牛呼吸道疾病综合征(BRDC)的重要病原，分为基因A型(BRAV)和基因B型(BRBV)。为建立同时检测BRAV和BRBV的双重荧光定量RT-PCR方法，本研究根据BRAV 5’非翻译区(5’NTR)和BRBV 3’非翻译区(3’NTR)分别设计特异性引物和Taq Man探针，通过优化各反应条件，初步建立了同时检测BRAV与BRBV的双重荧光定量RT-PCR方法。特异性试验结果显示，该方法仅对BRAV和BRBV检测为阳性，对其他常见牛呼吸道病原，包括D型流感病毒、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒1型、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型、牛支原体、多杀性巴氏杆菌、溶血曼氏杆菌、大肠杆菌和沙门菌检测结果均为阴性，特异性较强；敏感性试验结果显示，该方法对BRAV和BRBV重组质粒标准品的检测下限均为3.2×101拷贝/μL，敏感性较高；重复性试验结果显示，批内与批间重复性试验变异系数均小于5%，重复性较好。利用该方法与国外文献报道的3种BRAV荧光定量RT-PCR方法以及4种BRBV荧光定量RT-PCR方法同时检测43份BRDC患牛鼻拭子样品，结果显示该方法对BRAV和BRBV的检出率分别为32.56%(14/43)和30.23%(13/43)，其他方法对BRAV的检出率分别为0(0/43)、2.33%(1/43)、23.26%(10/43)，对BRBV的检出率分别为27.91%(12/43)、27.91%(12/43)、27.91%(12/43)、27.91%(12/43)，表明本研究所建方法的检测性能较强。本研究首次建立了同时检测BRAV和BRBV的双重荧光定量RT-PCR方法，其特异性强、敏感性高、稳定性好，并且首次证实BRAV在中国的存在，为BRDC的防控提供了重要参考。
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