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摘要
目的研制一种质粒DNA参考物质,包含副溶血性弧菌检测常用的目的靶基因——耐热直接溶血素(tdh)、不耐热直接溶血素(tlh)、和耐热相关溶血素(trh)、跨膜转录激活蛋白(toxR)基因序列,为副溶血性弧菌病原体的快速鉴定提供相关技术支持。方法使用人工DNA合成技术合成所需目的基因,构建重组质粒,并对其纯度、均匀性、稳定性、标准值、不确定度及在实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)中的应用进行评价。结果质粒DNA参考物质的纯度高,均匀性、稳定性良好,可用于检测副溶血性弧菌的的荧光定量PCR检验,与传统的基因组核酸参考品有可比性。结论该质粒DNA参考物质适用于以tdh、trh、tlh及toxR基因为靶标实时荧光定量PCR检测,为病原体的定性定量检测提供了技术支持,保证了检测结果的可靠性和可比性。
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