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摘要
目的 考察坏死性凋亡抑制剂及分子量为4 000的聚乙二醇（PEG-4000）对小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1表面一水草酸钙（COM）晶体黏附沉积的影响。方法 分别用400、800μg/m L COM作用于TCMK-1细胞，或先用受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（RIPK） 3抑制剂GSK-872预处理后再加入400、800μg/m L COM处理TCMK-1细胞，37℃孵育12 h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况，用CCK-8法检测细胞增殖活性，2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）探针法检测细胞氧化应激水平，蛋白质印迹法检测坏死性凋亡相关蛋白RIPK1、RIPK3、磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白（p-MLKL）的表达，电感耦合等离子体发射光谱法（ICP）检测细胞表面晶体黏附量。将TCMK-1细胞分为3组，分别用800μg/m L COM、先用PEG-4000溶液再加入800μg/m L COM、先用800μg/m L COM再加入PEG-4000溶液处理细胞，37℃孵育12 h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况，CCK-8法检测细胞增殖活性、DCFH-DA探针法检测细胞氧化应激水平，ICP检测细胞表面晶体黏附量。结果 400μg/m L COM作用时，与COM处理组相比，GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量减少、细胞增殖活性增强（P<0.05）、氧化应激水平降低（P<0.05）;800μg/m L COM作用时，与COM处理组相比，GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量无明显变化、细胞增殖活性增强（P<0.05）、氧化应激水平降低（P<0.05）、RIPK3和p-MLKL表达减少（P<0.05）。与COM处理组相比，PEG-4000预处理组TCMK-1细胞晶体黏附量明显减少、细胞增殖活性增强、氧化应激水平降低（P均<0.05），而后加入PEG-4000组与COM处理组相比晶体黏附量、细胞增殖活性、氧化应激水平均无明显变化（P均>0.05）。结论 用GSK-872抑制坏死性凋亡可以一定程度减少COM在细胞表面黏附沉积，但在较高的晶体负荷下晶体可在细胞表面聚集形成不定型沉淀。在培养基中使用PEG-4000预处理能够使COM微晶粒在悬液中保持悬浮稳定，减少晶体聚集沉积及细胞黏附和细胞氧化应激损伤；但充分接触COM晶体后的TCMK-1细胞再加入PEG-4000不能逆转晶体细胞黏附聚集沉淀。
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