CRISPR/Cas9技术在HepG2基因组中进行定点基因突变的探索

作者：肖利佳; 龙寿斌; 罗历; 沈化清; 郝建华

来源：海南医学, 2015, 26(01): 7-10.

DOI：10.3969/j.issn.1003-6350.2015.01.0003

• CRISPR
• HepG2
• 基因组编辑
• 定点突变

目的探索利用CRISPR/Cas9技术在细胞株Hep G2基因组中进行定点突变。方法设计并构建靶向核受体LRH-1和ERRα基因组序列的g RNA质粒。将构建好的g RNA质粒和h Cas9质粒转染Hep G2细胞后,PCR扩增Hep G2基因组中LRH-1和ERRα基因的突变位点,并用SURVEYOR法检测突变情况。结果靶向核受体LRH-1和ERRα基因组序列的g RNA质粒构建成功。Hep G2细胞经g RNA-LRH-1/g RNA-ERRα和h Cas9转染后,针对LRH-1和ERRα的突变位点基因组序列的PCR产物经SURVEYOR法检测结果显示出现两条与预计大小相符的电泳条带。结论在Hep G2细胞中成功利用CRISPR/Cas9技术介导的基因组编辑对LRH-1和ERRα特定基因组序列产生突变,为构建其细胞株敲除模型奠定了基础。

• 单位
  广东医学院附属南山医院