慢病毒介导RNA干涉Cbl-b抑制A549细胞增殖机制研究

作者：李鹏; 吕晓东; 闫相涛; 张国伟; 张米娜; 张晓娟; 杨金坡; 王慧娟; 马智勇^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2019, 33(04): 318-321.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2019.04.002

• 肺腺癌
• A549细胞
• 慢病毒介导RNA干涉
• 增殖
• Cbl-b
• 程序性死亡配体1

目的探讨敲减Cbl-b对程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1, PD-L1)蛋白表达及肺腺癌A549细胞增殖能力的影响。方法对数生长期A549细胞分为对照组和敲减组,2组采用慢病毒感染法转染目的基因,对照组转染空载体,敲减组转染慢病毒介导的干涉Cbl-b基因,转染后72 h采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白情况,判断转染效率。采用MTT法检测2组细胞转染成功后第1～5天细胞增殖率,采用Western blot检测2组细胞转染后Cbl-b蛋白相对表达量及转染成功后第3、4天PD-L1、Ki-67蛋白相对表达量。结果转染后,敲减组细胞Cbl-b蛋白相对表达量(0.18±0.03)低于对照组(0.75±0.01)(P<0.05);转染后第4、5天,敲减组细胞增殖率[(59.6±0.4)%、(87.2±1.4)%]低于对照组[(65.5±1.7)%、(98.2±2.8)%](P<0.05);转染后第3、4天,敲减组细胞PD-L1(0.51±0.00、0.55±0.02)和Ki-67蛋白相对表达量(0.35±0.01、0.25±0.00)低于对照组(0.55±0.01、0.67±0.02,0.47±0.01、0.33±0.02)(P<0.05),敲减组转染后第4天PD-L1相对表达量高于第3天,Ki-67蛋白相对表达量低于第3天,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论转染慢病毒介导RNA干涉Cbl-b基因能抑制A549细胞Cbl-b蛋白表达及细胞增殖;该过程伴随PD-L1表达上调和Ki-67表达下调。

• 单位
  郑州大学; 中心实验室; 河南省肿瘤医院