一种靶向Wee1蛋白激酶的小分子抑制剂体外筛选模型的建立

作者：周秋华; 苗雷; 季晓君; 左锐; 吴舰^*; 徐丹^*

来源：中国医药生物技术, 2022, 17(02): 138-144.

• MK-1775
• Wee1激酶
• DNA损伤
• 体外活性
• 药物联用
• 筛选模型

目的 建立靶向Wee1激酶的小分子抑制剂体外筛选模型，为Wee1抑制剂的筛选提供评价方法。方法 使用ADP-Glo法检测Wee1的激酶活性；在p53突变型人结直肠癌细胞（WiDr）上优化了损伤剂的作用时间与浓度以及Wee1抑制剂的作用时间，建立了评价Wee1抑制剂MK-1775单用以及与化疗药物吉西他滨联用的细胞活性评价模型；使用Odyssey in-cell Western方法检测细胞内Wee1的下游蛋白Cdc2及HH3的磷酸化水平，在细胞水平验证Wee1抑制剂的作用机制。结果 优化了DNA损伤剂吉西他滨的作用浓度（4.5 nmol/L）与作用时间（48 h）以及Wee1抑制剂MK-1775的作用时间（72h）。使用MK-1775对筛选模型进行验证，吉西他滨或MK-1775单用对细胞均表现出较弱的增殖抑制作用，而在联用实验中，MK-1775能明显增加吉西他滨对细胞的损伤作用，且3次重复实验结果稳定。结论 成功建立了一种简单、新颖、有效的Wee1激酶小分子抑制剂体外筛选模型。