重组酶聚合酶扩增结合Cas12a输血相关病原体核酸检测方法的可行性

作者：李晓红; 冯佳; 谢芳莘; 王蓓蕊; 何苗; 张勇刚; 马峰^*; 陈强^*

来源：中国输血杂志, 2020, 33(05): 453-458.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2020.05.009

• 重组酶聚合酶扩增
• Cas12a
• 巢式扩增
• 输血相关病原体
• 核酸检测

目的探讨重组酶聚合酶扩增(RPA)结合Cas12a检测输血相关病原体的可行性。方法 1)根据输血相关病原体HIV、HBV、HCV基因组保守区设计、筛选相应Cas12a crRNA。2)据crRNA靶序列区叠瓦状设计RPA巢式扩增内、外侧引物,凝胶电泳法和荧光探针法筛选巢式RPA内、外侧引物。3)通过质粒或病毒模拟标本梯度稀释,将含不同拷贝数或含量的靶序列RPA扩增,扩增产物以Cas12a检测评价RPA结合Cas12a的检测下限。4)用HIV、HBV、HCV相应近源病毒HTLV、WMHBV、HGBV的同源序列的重组质粒来评价所选crRNA的特异性。结果建立起RPA结合Cas12a核酸检测系统,16份重组质粒的检测下限为10 cp,8份EcoHIV病毒模拟标本的检测下限为1 fg,HIV、HBV、HCV 3种重组质粒及RPA扩增产物的交叉检测间未出现错误检出;10例HIV阳性确证标本的检测结果均为阳性。结论 RPA结合Cas12a检测HIV、HBV、HCV核酸是1种检出限和特异性均较好的核酸检测方法。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 实验血液学国家重点实验室