肺炎链球菌CiaR调控pbps和csRNAs基因表达作用及其与耐药相关性

作者：张新蔚; 黄燕颖; 楼永良; 严杰; 孙爱华

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2017, 37(1): 48-56.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2017.01.008

• 肺炎链球菌
• 耐药
• 反应调节蛋白/CiaR蛋白
• 基因敲除
• 青霉素结合蛋白/cia-依赖小RNA

目的 构建肺炎链球菌ciaR基因敲除(ΔciaR)突变株,了解该菌二元信号传导系统CiaH/CiaR中反应调节蛋白CiaR对青霉素结合蛋白基因(pbps)和cia-依赖小RNA基因(csRNAs)表达的作用.方法 采用电泳迁移率试验(ESMA)确定与重组表达CiaR蛋白(rCiaR)结合的pbps基因.构建用于敲除肺炎链球菌ciaR基因的自杀质粒pEVP3ciaR,通过自杀质粒同源重组、插入失活及氯霉素筛选获得ΔciaR突变株.采用PCR及测序鉴定ΔciaR突变株.采用E-test测定青霉素(PCN)和头孢噻肟(CTX)对肺炎链球菌菌株最低抑菌浓度(MIC).采用实时荧光定量RT-PCR,检测ΔciaR突变株及其野生株1/4 MIC PCN或CTX作用前后pbps-mRNAs和csRNAs水平变化与差异.结果CiaR能与肺炎链球菌pbp1a、pbp1b和pbp2b基因启动子区结合.PCR和测序结果证实ΔciaR突变株中ciaR基因被插入失活.1/4 MIC PCN或CTX作用后,肺炎链球菌ΔciaR突变株pbps-mRNAs水平明显升高(P<0.05)、csRNAs水平明显降低(P<0.05),但其野生株pbps-mRNAs水平明显降低(P<0.05)、csRNAs水平明显升高(P<0.05).E-test结果显示,PCN和CTX对ΔciaR突变株MIC均较野生株增加250倍.结论 肺炎链球菌CiaR可通过下调PBP1a、PBP1b和PBP2b表达或上调csRNAs表达抑制PBPs表达,使该菌对PCN 和CTX耐药性增强.

• 单位
  杭州医学院; 浙江大学; 温州医科大学