摘要
目的:观察茶黄素对人中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophilelastase,HNE)诱导气道黏液高分泌的作用。方法:采用HNE刺激人肺腺癌细胞A549,导致黏液高分泌,以茶黄素双没食子酸酯(theaflavin-3,3’-digallate,TF3)单体进行干预。首先用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)测定细胞活性,确定作用剂量,其后细胞分为4组进行实验,分别为A组:对照组;B组:HNE(50nmol/L)刺激24h;C组:用TF3(浓度分别为50、100、200μg/ml)作用24h后,再予HNE刺激24h;D组:先用EGFR阻断剂AG1478(5μmol/L)处理30min后,也予HNE刺激24h。并测定不同剂量和TF3(200μg/ml)不同作用时间(12h、24h、36h)的黏蛋白变化。RT-PCR检测各组黏蛋白(MUC)5ACmRNA的变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)观察MUC5AC蛋白表达的变化。结果:HNE能导致A549的MUC5ACmRNA和MUC5AC蛋白显著增高,而给予TF3预处理后,与HNE刺激组比,两指标均明显下调,且呈浓度剂量和作用时间正相关,其差异有统计学意义;茶黄素组与AG1478组比较,后者抑制作用更为明显;与对照组比,仍有增高。结论:茶黄素双没食子酸酯(TF3)单体可显著下调炎性气道的黏液高分泌,但并不能完全抑制炎性黏液的分泌。
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