抗菌肽GK1在大肠杆菌中的融合表达

作者：陆海荣; 李国栋; 吴宏宇; 黄晋江; 汪世龙; 黄青山

来源：生物工程学报, 2008, (01): 21-26.

DOI：10.13345/j.cjb.2008.01.003

• 抗菌肽
• 融合蛋白
• 大肠杆菌 antimicrobial peptide
• fusion protein
• Escherichia coli

为高效表达抗菌肽GK1并避免GK1的高抗菌活性对大肠杆菌宿主菌的致命影响,将经改造后的人胰岛素原(mhPI)与GKJ的融合基因(mhPI-GKI)克隆到表达载体pET28a中,构建出表达质粒pET28a-mhPI-GK1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的20%。经CNBr裂解、阳离子交换层析和RP-HPLC纯化后,每升发酵液可获得5.7 mg纯度大于97%的重组GK1。质谱检测显示重组GK1的分子量为2794.0 D,抑菌活性实验表明纯化后的重组GK1和化学合成GK1具有相同的抗菌活性。为利用基因工程方法大规模生产GK1奠定...

• 单位
  遗传工程国家重点实验室; 同济大学; 复旦大学; 上海高科联合生物技术研发有限公司