葡萄糖转运促流感病毒复制的机制研究

作者：师娟; 范砚茹; 刘晓丽^*

来源：中国病原生物学杂志, 2021, 16(04): 455-460.

DOI：10.13350/j.cjpb.210417

• 流感病毒
• H9N2
• miR-345-3p
• EHD2
• 葡萄糖转运

目的探讨流感病毒H9N2复制与葡萄糖转运之间的潜在联系。方法 H9N2感染A549细胞后,检测葡萄糖转运对其复制的影响。感染H9N2后高通量测序检测调控此生理过程的潜在miRNA。通过过表达miRNA筛选影响葡萄糖转运的miRNA。miRDB在线分析和荧光素酶报告试验鉴定miRNA底物。结果 H9N2感染A549后,A549细胞葡萄糖转运水平上升(31.2±7.1 vs 123.5±24.9,t=6.138,P<0.05)。葡萄糖转运抑制剂Phloretin处理A549后,H9N2复制水平显著下降(5.2±1.0 vs 1.6±0.2,t=6.035,P<0.05)。葡萄糖转运激动剂Insulin处理A549后,H9N2复制水平显著上升(5.6±0.9 vs 14.3±2.5,t=5.493,P<0.05)。高通量测序显示,H9N2感染后37种miRNA的表达发生显著变化。当敲低miR-345-3p时,A549细胞葡萄糖转运水平显著上升(25.4±5.3 vs 175.2±31.2 t=8.239,P<0.05),H9N2的复制水平显著上升(5.2±0.9 vs 10.6±1.6 t=4.780,P<0.05)。过表达miR-345-3p后,A549细胞葡萄糖转运水平显著下降(26.4±6.1 vs 4.7±0.2,t=6.159,P<0.05),H9N2的复制水平显著下降(5.2±0.9 vs 1.1±0.1,t=7.583,P<0.05)。miRDB在线分析显示,miR-345-3p潜在靶向74个基因。过表达miR-345-3p后,其中14个基因的表达发生6倍以上的变化。当敲低EH结构域蛋白2(EH Domain Containing 2,EHD2)时,H9N2的复制水平显著下降(4.6±0.9 vs 0.5±0.1,t=8.026,P<0.05)。过表达miR-345-3p时,EHD2的表达水平下降;敲低miR-345-3p时,EHD2的表达水平上升。此外,miR-345-3p靶向EHD2的3′端非编码区。过表达miR-345-3p后,H9N2的复制水平显著上升(5.6±0.6 vs 16.3±3.2,t=5.653,P<0.05),葡萄糖转运水平上升(35.1±7.0 vs 154.2±22.2,t=8.928,P<0.05);敲低miR-345-3p后,H9N2的复制水平显著下降(6.0±0.3 vs 0.9±0.0,t=25.78,P<0.05),葡萄糖转运水平下降(42.0±5.1 vs 11.1±3.1,t=9.208,P<0.05)。H9N2感染并敲低miR-345-3p后,EHD2和GLUT4的相互作用减弱。敲低GLUT4后,H9N2的复制水平显著下降(4.8±0.2 vs 0.9±0.1,t=26.90,P<0.05)。H9N2感染并过表达miR-345-3p后,EHD2和GLUT4的相互作用增强。敲低GLUT4的同时过表达EHD2后,H9N2的复制水平无显著变化(1.1±0.1 vs 1.1±0.0,t=0.6573,P>0.05)。结论 H9N2通过降低miR-345-3p的表达使EHD2高表达,并增强EHD2与GLUT4的相互作用以促进葡萄糖的转运,最终促进自身基因组的复制。

• 单位
  河南省人民医院