重组蛋白A在大肠杆菌中的分泌表达及活性测定

作者：张秀华; 刘素丽; 刘彬; 邢芸; 范豪; 曹荣月; 刘景晶

来源：药物生物技术, 2012, (01): 11-15.

DOI：10.19526/j.cnki.1005-8915.2012.01.003

• 重组蛋白A
• 大肠杆菌
• 分泌表达
• 酶联免疫反应 Recombinant protein A
• E.coli
• Secretory expression
• ELISA

利用大肠杆菌表达系统表达金黄色葡萄球菌蛋白A,根据大肠杆菌密码子偏好性对金黄色葡萄球菌蛋白A的基因序列进行密码子优化,在N端加入L-门冬酰胺酶(L-AsPsII)信号肽简并基因序列使其分泌表达,将全合成的蛋白A基因片段插入到pET-28a载体中,转化入BL21(DE3)。乳糖诱导使其表达,其中80%以上目的蛋白位于胞外,表达量达到375 mg/L,剩余目的蛋白位于周质。将胞外目的蛋白超滤浓缩,通过DEAE阴离子交换剂,一步纯化后得到的蛋白,在SDS-PAGE上显示为约32 k的单一条带,纯度达95%以上。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组蛋白A活性较高,能与小鼠、兔及羊IgG抗体高效结...

• 单位
  中国药科大学; 天然药物活性物质与功能国家重点实验室