‘白花建’莲酵母双杂文库构建及NnWRKY40互作蛋白筛选

作者：陈思梦; 王锦鑫; 党明静; 王政道; 李静^*

来源：植物科学学报, 2023, 41(04): 447-457.

• 莲
• 酵母双杂交
• NnWRKY40
• 蛋白互作

通过构建莲（Nelumbo nucifera Gaertn.）品种‘白花建’不同组织的混合cDNA文库，筛选与莲转录因子NnWRKY40互作的蛋白，探究NnWRKY40参与调控次级代谢物生物碱合成的可能机制。结果显示，混合cDNA文库的库容为1.2×107 CFU，重组率为100%，插入片段平均长度大于1 000 bp。NnWRKY40包含两个同源基因NnWRKY40a和NnWRKY40b，利用NnWRKY40b构建诱饵载体pGBKT7-NnWRKY40b，通过共转化方法，从文库中筛选到27个与NnWRKY40b互作的蛋白。这些互作蛋白可分为生长发育及抗逆、激素调控和次级代谢、未知蛋白3类。选取6个代表性互作蛋白（NnUBC、NnPEBP、NnPPOA、NnCHS、NnJAZ1和Unknown protein 3）进行一对一验证，发现其中JAZ蛋白与次生代谢物生物碱合成相关，提示NnWRKY40b转录因子可能与茉莉酸（JA）介导的生物碱合成调控密切相关。

• 单位
  武汉理工大学; 生命科学学院