猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白原核表达纯化及其蛋白酶活性分析

作者：瞿洪仁; 李耀东; 侯艳红; 严景华

来源：微生物学报, 2009, 49(11): 1502-1509.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.2009.11.018

• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 非结构蛋白Nsp2
• 亲和层析
• 凝胶过滤

【目的】表达并纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2(Nsp2),分析Nsp2的蛋白酶活性。【方法】本研究通过PCR分别扩增nsp2基因的N端和C端,利用原核表达载体pET21a(+)表达Nsp2蛋白的N端和C端(即Nsp2-N和Nsp2-C),通过Ni-NTA琼脂糖亲和层析和凝胶过滤的方法纯化两个重组蛋白。预测Nsp2-N含有半胱氨酸蛋白酶结构域,本研究利用western blot检测其顺式酶切蛋白酶活性;并人工合成潜在的十肽底物,利用体外多肽酶切实验检测其反式酶切蛋白酶活性。成功获得Nsp2-N和Nsp2-C蛋白的可溶性表达,纯化后纯度高达90%,预测的Nsp2-N蛋白酶结构域在顺式切割和反式切割下均无法发挥蛋白酶活性。【结论】推测Nsp2-N中所预测的蛋白酶结构域其活性的发挥还需要其他宿主因子的辅助作用,为进一步鉴定其生物活性和筛选抗病毒药物研究提供基础。

• 单位
  中国科学院微生物研究所; 中国科学院研究生院